VIBRIO CHOLERAE

• Vibrio cholerae

Pertumbuhan Vibrio cholerae dalam perbenihan TCBS,

• Peralatan

1. Alat homogenisasi (blender atau stomacher)
2. Inkubator 36 1*C dan 22 1*C
3. Penangas air 45*C
4. Sengkelit (ose)
5. Cawan petri (100x15mm)
6. Gelas sediaan tetes gantung
7. Mikroskop 
8. Lemari pendingin 
9. Pipet ukur 
10. Tabung reaksi
11. Cakram polymyxin

• Perlengkapan lain 

1. Washed sheep red bloods cells 
2. Washed chicken red bloods cells 
3. Phage 4 
4. Sera anti Ogawa da inaba untuk Vibrio cholerae 
5. Antisera polyvalent O untuk Vibrio cholerae 

• Perbenihan 

1. Thiosulfate  citrate bile salt agar (TCBSA)
2. Aronson's agar 
3. Taurocholate trypticase telururite agar (TTTGA)
4. Gelatine agar 
5. TSI agar 
6. Motility Indole (MI) agar
7. Nutrient agar 

1. Peptone Sugar proth (1%gula),masing-masing tabung berisi glukosa sakarosa,arabinosa,mannosa,mannitol dan inositol.
2. Decarboxilase test media terdiri dari L-lysin 1% L-arginin,L-ornithin dalam basah medium.
3. Hugh-leifson medium
4. Tetramethyl paraphenylene diamine dihydrochloride
5. Heart infusion Broth 
6. Buffered glucose Broth 

• Larutan pengencer 

Alkaline peptone water atau peptone dilution fluid 3% NaCl

• Pereaksi 

1. Vibriostatic 
2. Mineral oil
3. Salinesolution 
4. Pereaksi voges-proskauer
5. Formalinized mercuric iodide saline solution 

Cara kerja 
   
      Isolasi Vibrio cholerae
a. Lakukan homogenisasi contoh dengan cara seperti A.6. Dengan cara menggunakan larutan pengencer alkaline peptone water. Inkubasikan pada suhu 36*C selama 6 jam. Pindahkan 1 Sengkelit suspensi,inokulasikan ke TCBS agar dan perbenihan yang tidak selektif seperti nutrient agar,aronson's,dan TTTGA. Inkubasikan pada suhu 36*C selama 18-24 jam.
b. Inokulasikan 1 Sengkelit dari biakan alkaline peptone water yang berumur 6 jam ke dalam tabung yang berisi 10 ml alkaline peptone water yang masih baru.inkubasikan tabung selama 6 jam. Pindahkan 1 Sengkelit suspensi diatas TCBS agar,nutrient agar,aronson's agar / TTTGA,Inkubasikan pada suhu 36+1*C.
c. Lakukan uji Motility pada kaca alas tetes gantung dengan menggunakan biakan alkaline peptone water yang berumur 6 jam. Selanjutnya Inkubasikan biakan alkaline peptone water pada suhu yang ditetapkan selama 18-24 jam. Inokulasikan ke tiap dua perbenihan lempeng (TCBS agar,nutrient agar). Aronson's agar atau TTTGA). Inkubasikan pada suhu yang telah ditetapkan yaitu selama 18-24 jam.
d. Inokulasikan 3 atau lebih koloni tersangka ke atas nutrient agar miring ( Slant agar).

Keterangan :

* Koloni tersangka Vibrio cholerae pada TCBS agar ditandai ditandai dengan koloni besar (2-3mm) ,halus,berwarna kuning,sedikit datar dengan bagian tengah keruh dan sekelilingnya translusen ( bening).
* Di atas gelatine agar,koloni transparant dan "zone berawan sekelilingnya" lebih jelas setelah beberapa menit dalam lemari pendingin.
* Di atas aronson's agar,koloni 2-3mm,halus,translusen dan agak cembung,dengan bagian tengah berwarna merah muda atau merah dan sekelilingnya tidak berwarna.

* Pada nutrient agar,koloni besar translusen warna ke abu-abuan.